完整的感染人体后,随着血流通过特殊的识别被吸附到与HBV有特殊亲和的敏感肝细胞膜上,然后再通过特殊的“穿入”过程而进入肝细胞浆内。有人认为,这种“穿入”过程是因为肝细胞表面存在人血清聚合蛋白(PHSH)受体,通过PHSH介导而穿过肝细胞膜。HBV在肝细胞浆内脱去外壳,HBV的核心(核蛋白)通过某种机制进入肝细胞核。病毒进入肝细胞后,先以负链DNA为模板,正股DNA延长形成完整的环状双股DNA,转录出2种RNA,一种为信使RNA转录外衣壳蛋白,另一种称前基因组RNA。前基因组RNA是病毒复制的中间体,其在HBV复制周期中起着两个基本功能:①作为反转录模板;②作为mRNA编码多聚酶和核心蛋白。在DNA多聚酶作用下,逆转录全长负链DNA,再以新合成负链DNA为模板复制正股DNA成为双股DNA,然后在胞浆内与衣壳蛋白装配成完整病毒颗粒,释放到细胞外。HBV基因组编码合成的病毒蛋白有两类:结构蛋白有外膜和核壳蛋白,用于组装完整的病毒颗粒;功能蛋白有聚合酶和X蛋白,参与病毒的复制过程。但是,在结构蛋白中也含有不是构成病毒必需的前S2蛋白和HBeAg,却为病毒在易感人群中扩展和持续感染所必需。
变异是生物适应环境生存的重要方式,对遗传进化是很重要的。由于HBV有逆转录复制过程,所以其变异率较一般DNA病毒高约4个数量级。最近的研究表明,由于HBV的变异率非常高,以致于没有两株病毒的核苷酸序列完全相同。
(七)细胞培养
.P基因区编码DNA多聚酶,P基因的3/4与其他基因有重叠。此外,在HBV基因组中还有启动子与增强子。增强子具有肝细胞专一性,也就规定了HBV的亲肝性,在调节HBV基因表达中起重要作用。每个开放读码框架分别有各自的启动子,其中C基因启动子cp是多功能的,它是HBV复制的关键调节因子。
(二)功能
.S基因区由S基因、前S1基因及前S2基因组成,各有其起始密码ATG,前S2和S基因在所有HBV亚型都是恒定的长度,而前S1基因的5′端在ad亚型较ay亚型多33(adr)或12bp(adw)。分别编码长度不同的三种蛋白,即S、前S1和前S2蛋白。有2个起始密码子分别位于前C区和C区。
.C基因区基因编码e抗原(HBeAg)和核心抗原(HBcAg)。
乙肝病毒的感染性并不完全与其抗原性和免疫原性一致。失去感染性,其抗原性和免疫原性仍可能保留。
.X基因区编码X蛋白(X抗原,HBxAg),与肝细胞癌变有一定关系。
变异广泛存在于基因组的不同部位:前S/S基因,前C/C基因和X/C区段;这些部位与P基因重叠,所发生的变异同时是P基因的变异。HBV变异较常出现于某些特定的位点(热点),可单独存在于某基因区,也可同时出现在几个基因区。HBV基因变异与临床疾病的关系还需深入研究。
(一)结构
基因组为非闭合的双股环状DNA,双链的长度不对称。负链(长链)有一小缺口,由3200核苷酸组成,与病毒mRNA互补,其3′端有11个碱基组成的重复序列(DR1)。正链为短链,仅5′端固定,长度为负股的1/2~3/4,其3′端位置不定。两链5′开始的250个核苷酸互补被称为黏性末端,正链3′端具有与负股相同的11个碱基的重复序(DR2)。DR1和DR2在病毒复制中起重要作用。DR1是前基因组RNA和负链DNA合成的起点;DR1和DR2的相对同源性,使HBV DNA分子在复制过程中形成长黏性末端,进而形成环状。
黑猩猩和长臂猿等高等灵长类动物,是国外人类乙型肝炎病毒感染模型常用的动物。黑猩猩与人有近缘关系,且对HBV易感,是进行HBV实验感染最敏感、最理想的动物,接种病毒后100%有HBV感染的血清标志。此外,表达乙肝病毒全基因组或特定基因的转基因动物模型,可用于研究HBV发病机制、药物疗效的评价。
负链核苷酸序列有4个主要开放读码框架(ORF),分别为S基因区、C基因区、X基因区和P基因区。
颗粒在氯化铯中的浮密度为1.22g/ml,乙肝表面抗原颗粒的浮密度为1.18g/ml。HBV对外界环境抵抗力较强,对热、低温、干燥、紫外线和一般消毒浓度的化学消毒剂均能耐受。30~32℃可存活至少6个月;在-20℃活性可保存15年;在37℃可保存7天;在56℃尚可维持6小时;60℃加热1小时,98℃加热1分钟,乙醚或pH2.4处理6小时,都不能完全灭活乙肝病毒。反复冻融20~40次、腐败或以酸碱处理,其抗原性很少改变。121℃高压20分钟,100℃干烤1小时,100℃直接煮沸2分钟,
(三)理化特征
我国用树作为HBV感染模型进行了较长期的研究,发现其对HBV易感,可进行连续传代感染,且发现人HBV-DNA可整合到树肝癌细胞基因中。树感染人HBV后表现为急性自限性乙型肝炎,血清HBsAg很快被清除,并随之产生抗-HBs和抗-HBe。但是,该模型能否用于研究HBV分子生物学、HBV感染的临床规律,以及评价各种抗病毒治疗的疗效,还有待进一步重复实验证实。
%过氧乙酸、3%漂白粉溶液、5%次氯酸钠和环氧乙烷等处理,可灭活乙肝病毒。
(四)复制
乙型肝炎的基因组,具体如下介绍:
(六)动物模型
随着基因杂交技术的进展,虽已发现HBV基因可在多种脏器细胞中找到,但人们仍认为HBV是一种嗜肝病毒。HBV的复制是在肝细胞内完成的,但复制过程至今还未完全清楚。
(五)变异












